ANKLにおけるPPMX-T003由来の細胞毒性に寄与する分子を検出するために、トランスクリプトームとin vivo CRISPRスクリーニングの接続性スコアリング分析が実施された。抗γH2AX抗体とプロピジウムヨウ化物を使用して、細胞周期依存性DNA損傷誘導を評価した。単細胞RNA配列を使用して、S相細胞周期で特異的に発現した分子を検出し、続いて標的細胞ノックアウト分析を行い、CRISPR/Cas9システムを使用してその機能を明らかにした。JPH-203は、ANKL細胞に対するPPMX-T003の抗腫瘍効果に対するLAT1を介した細胞アミノ酸流入の寄与を評価するために使用された。
結果：
私たちは、PPMX-T003の抗腫瘍効果が、トランスクリプトームの接続スコアリング分析によって、従来の細胞毒性剤と同様に、DNA複製依存的な方法でDNA二本鎖切断によって特徴付けられることを最初に明らかにしました。さらに、鉄を必要とする分子をコードする遺伝子を標的とするsgRNAライブラリを使用したin vivo CRISPRスクリーニングは、肝臓に常駐するANKL細胞が、増殖信号開始ではなく、主に細胞周期のS段階でのDNA複製と修復のために細胞外鉄補給に依存していることを明らかにした。したがって、単一細胞RNA-seqを使用してANKLの増殖に寄与する環境要因をさらに調査し、大きな中性アミノ酸トランスポーター1（LAT1）をコードする遺伝子であるSLC7A5がS相ANKL細胞で特異的に発現し、その阻害またはノックアウトはG1停止による成長障害をもたらした。LAT1を介して輸送されるアミノ酸の中で、硫黄含有アミノ酸はANKL増殖の重要な調節因子として注釈され、濃度の低い環境でのANKL細胞は細胞増殖活性と細胞鉄の必要量を低下させ、PPMX-T003に抵抗した。阻害剤JPH-203によるLAT1阻害はまた、ANKLの成長活性を低下させ、PPMX-T003に対する耐性を提供する。
欧州血液学会事前抄録の機械翻訳
要約: P1250
タイトル：LAT1経由のアミノ酸流入は、積極的な天然キラー細胞白血病の鉄依存性を調節する
抽象的なタイプ：ポスタープレゼンテーション
トピック: リンパ腫生物学とトランスレーショナル研究の背景:
積極的なナチュラルキラー細胞白血病(ANKL)は、フルミナント臨床コースを持つまれな血液学的悪性腫瘍です。いくつかのレトロスペクティブ分析は、併用化学療法を含むL-アスパラギナーゼの有効性を示しているにもかかわらず、疾患の希少性のために確立されたケアの基準はありません。このような状況下で、私たちは以前にANKL病マウスモデル(患者由来の異種移植マウス)を確立し、ANKL細胞は主に肝副鼻腔で増殖し、モデルを分析することによってトランスフェリン補給に強く依存することを発見しました。さらに、肝臓に常駐するANKL細胞は、抗ヒトトランスフェリン受容体1阻害抗体であるPPMX-T003に非常に敏感であることを実証しました。この調査に基づいて、ANKLに対するPPMX-T003の安全性と有効性を明らかにする第Ib/II相臨床試験が進行中です。しかし、肝外ANKL細胞はトランスフェリン受容体の閉塞に耐性があり、ANKLの鉄依存性が局在する環境要因によって決定されることを示しています。
目的：
私たちは、ANKL細胞の鉄依存性を決定する微小環境要因を検出することを目的としました。
方法:
ANKLにおけるPPMX-T003由来の細胞毒性に寄与する分子を検出するために、トランスクリプトームとin vivo CRISPRスクリーニングの接続性スコアリング分析が実施された。抗γH2AX抗体とプロピジウムヨウ化物を使用して、細胞周期依存性DNA損傷誘導を評価した。単細胞RNA配列を使用して、S相細胞周期で特異的に発現した分子を検出し、続いて標的細胞ノックアウト分析を行い、CRISPR/Cas9システムを使用してその機能を明らかにした。JPH-203は、ANKL細胞に対するPPMX-T003の抗腫瘍効果に対するLAT1を介した細胞アミノ酸流入の寄与を評価するために使用された。
結果：
私たちは、PPMX-T003の抗腫瘍効果が、トランスクリプトームの接続スコアリング分析によって、従来の細胞毒性剤と同様に、DNA複製依存的な方法でDNA二本鎖切断によって特徴付けられることを最初に明らかにしました。さらに、鉄を必要とする分子をコードする遺伝子を標的とするsgRNAライブラリを使用したin vivo CRISPRスクリーニングは、肝臓に常駐するANKL細胞が、増殖信号開始ではなく、主に細胞周期のS段階でのDNA複製と修復のために細胞外鉄補給に依存していることを明らかにした。したがって、単一細胞RNA-seqを使用してANKLの増殖に寄与する環境要因をさらに調査し、大きな中性アミノ酸トランスポーター1（LAT1）をコードする遺伝子であるSLC7A5がS相ANKL細胞で特異的に発現し、その阻害またはノックアウトはG1停止による成長障害をもたらした。LAT1を介して輸送されるアミノ酸の中で、硫黄含有アミノ酸はANKL増殖の重要な調節因子として注釈され、濃度の低い環境でのANKL細胞は細胞増殖活性と細胞鉄の必要量を低下させ、PPMX-T003に抵抗した。阻害剤JPH-203によるLAT1阻害はまた、ANKLの成長活性を低下させ、PPMX-T003に対する耐性を提供する。
要約/結論:
まとめると、LAT1を介した細胞外硫黄アミノ酸流入の量が、ANKL細胞の鉄依存性を決定する重要な環境要因であることを発見しました。これは、肝臓と脾臓に常駐するANKL細胞間のPPMX-T003に対する異なる感度について良い説明を提供します。
腸から吸収された豊富なアミノ酸が含まれています。